| 膜过滤法微生物检验简介
快速微生物检验法
1、从传统微生物检验技术的基础上发展而来的快速微生物检验方法已经使用了20多年，在微生物检验技术上并没有本质上的提高，只是在微生物的样品准备上和微生物的计数上相对于传统微生物检验方法有所提高
A：SpirlPlating方法
这种方法是将带有浓度梯度的菌悬液涂布在预先倾注好的选择性和非选择性的琼脂平板上，菌悬液从琼脂平板中心向周围浓度递减，将琼脂平板在合适的温度下经过适当时间的培养后通过激光计数器对琼脂平板上的菌落进行扫描计数，样品的准备和计数时间相对于传统的微生物检验法节省了时间，利用这种原理的快速微生物检验产品主要有AUTOPLATER(SpiralBiotech,Bethesda，Md·，U．S．A)。
B：Isogrid快速微生物检验系统
这种方法是基于膜过滤法而进行的快速微生物检验法，微孔过滤膜上带有疏水的边缘将微孔滤膜分成1600个小格，样品经过处理，稀释和酶处理，通过真空过滤，每个微生物被截留在每个小格中，微生物经过适当温度，适当时间的培养后，通过肉眼或者激光探头对膜上的微生物菌落进行计数。ISOGRID(QA实验室公司，圣地亚哥，加利福尼亚，美国)就是这种原理的快速微生物检验装置。
C：PETRIFILM微生物测试片
这种快速微生物测试片是将预先脱水的培养基粘附在膜中，将处理好的液体样品lml接种在膜上，在经过相应时间和相应温度的培养下，在对膜上的微生物菌落总数进行计数，膜内粘附的培养基可以是选择性培养基或者是非选择性培养基，可以对某些微生物进行计数。PETRIFILM是3M公司的产品。
以上这些方法都是将微生物培养到一个可视的菌落后进行计数的，虽然在样品准备过程中和计数过程中节省了时间，但是微生物还是要培养到肉眼可见的菌落才能计数，它还是有一定的局限性。
2、荧光显微计数原理的快速微生物检验装置 由于以上提到的几种快速微生物检验技术都有一定的局限性，一些新的快速微生物检验方法得到了更为广泛的应用，这些方法可以实现微生物检验的实时监控。 这种微生物检验方法是通过膜过滤法对可过滤样品首先进行过滤，在过滤后，将样品经过适当的温度和适当的时间进行培养，再使用比较先进的微生物检测技术对微孔过滤膜上的微生物进行检测，由于检测手段比较先进，因此在微生物经过一段非常短的时间后，就可以使用先进的激光扫描装置或者高倍的CCD显微镜对微菌落进行检测，这种快速微生物检验方法的培养时间通常是非常短的(几分钟到几个小时)，这种方法已经被全球的大型食品饮料企业所采用，并证明是十分有效的。
MILLIPORE公司的快速微生物检验系统就是基于以上原理而形成的快速微生物检验装置，它是首先将样品过滤，将微生物富集在带有网格的微孔过滤膜上，经过短暂的培养后，通过高倍微生物成像技术将微生物检验结果以CFU的形式输出在电脑中并通过打印机打印出来。
另外一家美国公司Chemunex也是应用膜过滤法，但是它是通过丫腚橙对微生物进行染色后通过激光进行检测的另外一套微生物快速检验装置。
3、快速微生物鉴定系统的原理与应用
在食品饮料的微生物检验过程中，对食品中的致病微生物和导致食品饮料发生污染的病原微生物进行鉴定是十分重要而又十分必要的。现今流行的快速微生物鉴定系统主要是通过将传统的微生物的生化反应整合到比较小的反应试剂盒中，使数十个生化反应同时进行，检验结果可以手工或通过半自动的系统来完成，通过数据库来查出微生物的种属。
现今行业中流行的快速微生物鉴定系统非常得多，以生物梅里埃的VITEK和BIOLOG市场占有率最高。这两种方法的准确性较好，在市场上有很广泛的应用。
4、电导法原理的快速微生物方法 由于微生物的生长伴随电荷的产生，微生物在培养基中生长会发生电导率的微量变化，这种微量变化可以被检测器检测出来，应用此原理对微生物检验样品进行计数，对于细菌，在生长过程中会释放出电子，但是作为霉菌酵母而言，在生长过程中不但不会释放电子，还会吸收电子，导致霉菌酵母检验时间比较长。
这种快速微生物检验方法受影响的因素较多，温度，菌落浓度，菌落种类的影响较大，检验时间较长。
基于电导的快速微生物检验法的产品有生物梅里埃的BACTOMETER和马色斯的快速微生物检验系统。
5、免疫酶联反应原理
采用抗原抗体反应的原理进行快速微生物检测，抗原抗体反应有一定的反应专一性，每种菌的表面都有其特定的抗原决定族，要有相应的抗体才能与其结合，在抗体表面添加荧光物质使结合抗体的抗原显色，通过荧光物质的浓度来决定其某种菌的浓度。
6、聚合酶链反应(PCR) 通过将低浓度样品中的微生物的DNA进行PCR扩增，使其浓度达到可以检测的水平，在一定的检测手段下确定样品中是否含有某种致病微生物。这种方法十分可靠，具有很好的使用前途，目前世界上应用这种快速微生物监测系统的研究单位很多，但是它作为一种新型的快速微生物检验方法，对于技术人员的分子生物学的基础要求非常高，因此未被在生产行业广泛应用。
饮用水的微生物检测
由于食品饮料行业的生产用水的进水通常使用饮用水，因此企业就有必要对饮用水的微生物限度定期地进行微生物的限度检验和对水中的游离氯含量进行检测，饮用水的微生物限度是不能含有肠杆菌，并且微生物总菌计数不得大于500CFU／ml，游离氯的含量须在0．2-2ppm之间以控制微生物的增殖。虽然在水中有氯离子控制微生物的含量，但是由于季节，有机物质以及降雨量的变化，微生物的含量不尽相同，因此建立良好的饮用水的检测手段是十分必要的，大多数企业每月对饮用水进行检测一次。 由于水中含有氯离子和其他卤族元素离子，并且它们对微生物的生长有抑制作用，因此要加入合适的中和剂以中和其中的氯离子和其他卤族元素离子，使微生物得以生长。
在饮用水的微生物检测中，混合平板法是最为广泛应用的微生物检验法，R2A琼脂培养基对水中的微生物有良好的还原生长能力，因此被广泛应用。对于肠杆菌的微生物检验，大多数公司通常采用膜过滤法进行微生物限度检测，因为这样检验的取样量才具有更好的代表性，用于检验肠杆菌的微生物培养基通常是M-Endo琼脂培养基。
纯化水的微生物检测
对要求较高的纯化水来说，它的微生物限度要求为100CFU／ml,但是FDA以及PDA在超纯水的监测指导中声明，行动标准大于100CFU／ml都是不被允许的。 大多数企业是采用膜过滤法进行微生物检测的，采用0．45um的微孔过滤膜经微生物截流在膜上，再将膜置于相应的培养基上在适当的培养条件先进行培养，这种方法更加适合于要求严格的水系统和可过滤产品的微生物检验上。
在水系统处理过程中，大多数的生产用水系统的处理方法能有效的控制微生物的生长并能进一步阻止生物膜的形成，因此取样1ml来进行微生物检验对于有效的监控水系统和作趋势分析都不是很有效，有必要使用更为灵敏的微生物的检测手段进行检验，膜过滤法是一种很好的选择，它可以检测出水中低生长的微生物，使企业税系统得到良好的质量控制。
在纯水系统建立的后继的12个月里，应对水系统的季节性的微生物种类和数量变化进行分析，从而得到有用的数据。对于水系统的微生物检验，无论从取样点的设计，取样频率，采样量，检验方法以其清洁程序等方面都应该详细的列入企业自己的SOPs中，对于培养基，还因对其无菌性和细菌生长性进行检测，所有的微生物相关检验方法都要经过验证。得到的微生物检验结果通常是要定期地进行回顾和趋势分析，这些数据都会在今后分析水系统污染的原因时提供有力的证据，比如革兰氏阴性菌通常是水系统中常见的微生物，而如果发现葡萄球菌，可能是由于不当的微生物取样方法所致，对于水系系统中发现的革兰式阳性菌的污染，通常可以追溯到环境中带来污染的可能。对于超出行动限的微生物检验结果，要立即采取迅速的调查和整改行动，结合历史数据和趋势分析结果，采取相应的措施，将水系统控制在一个良好的运行过程中。
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